Новости

Dec 30, 2023

Новое поколение гибких и контролируемых методов CAR T (Часть 3)

Ячейками SynNotch можно точно управлять в сочетании с универсальным адаптером.

Клетки SynNotch можно точно контролировать в сочетании с универсальным адаптером для CAR T и других клеточных методов лечения.

Это последняя статья в нашей серии об альтернативных методах CAR T-терапии. В первой части описывается версия CAR T, в которой используется универсальный адаптер. Во второй части рассказывается о SNAPtag, альтернативной терапии CAR T. Посетите веб-сайт www.williamhaseltine.com, чтобы узнать больше о CAR T-терапии.

В предыдущей статье мы описали альтернативный клеточный метод лечения, основанный на рецепторах SynNotch. Эти синтетические рецепторы реагируют на определенный входной сигнал и вызывают желаемый клеточный ответ. Эта модульная конструкция обещает большую терапевтическую гибкость, чем ее более известный аналог — CAR T-терапия. Конструкция еще больше улучшается при интеграции с универсальным адаптером SNAPtag. Здесь мы опишем, как исследователи из Питтсбургского университета разработали этот дуэт адаптеров SynNotch и как он работает.

SynNotch и универсальный адаптер

Клетки SynNotch зависят от факторов транскрипции для изменения гена, в то время как Т-клетки CAR запускают сигнальные каскады Т-клеток. Несмотря на то, что эти два метода лечения основаны на разных механизмах, они имеют схожие ограничения: их трудно контролировать, и они могут воздействовать только на один антиген одновременно. С этой целью Руффо и его коллеги стремились разработать адаптер, который работал бы не только с Т-клетками CAR, но и с Т-клетками synNotch.

Адаптер теоретически должен создавать мост между рецептором и целевым антигеном. Таким образом, использование адаптера на клетках SynNotch позволит терапии воздействовать на несколько антигенов одновременно или последовательно. Антигенную мишень также можно изменить путем введения нового антитела с той же меткой. И что важно для контроля, терапию можно остановить или усилить, изменив концентрацию адаптера или введя метки в качестве конкурентного ингибитора.

Универсальный адаптер

Как было показано ранее, универсальный адаптер состоит из двух ключевых элементов: антитела и метки бензилгуанина (BG) (рис. 1). Метка постоянно прикрепляется к внеклеточной части рецептора synNotch посредством ковалентной связи. Между тем, хвост антитела распознает специфический антиген на клетке-мишени и связывается с ним. Связывание антигена растягивает рецептор SynNotch и открывает сайт расщепления на его коровом белке. Как показано на рисунке 2, ферменты разрезают сайт расщепления и высвобождают транскрипционный фактор во внутриклеточный домен клетки. Транскрипционный фактор должен попасть в ядро, где он влияет на экспрессию целевого гена.

РИСУНОК 1. Универсальный адаптер состоит из двух компонентов: антитела и метки бензилгуанина (BG). ... [+] Метка ковалентно связывается с рецептором synNotch, в то время как антитело связывается со специфической мишенью антитела. Одна и та же метка может быть слита с различными антителами, что позволяет рецептору synNotch реагировать на широкий спектр антигенных мишеней.

РИСУНОК 2: Рецепторы SynNotch запускают другой путь, чем CAR T-клетки, в присутствии ... [+] универсального адаптера. Когда метка-адаптер связывается с рецептором (а антитело-адаптер с целевым антигеном), механические тянущие силы растягивают рецептор и обнажают сайты расщепления на коровом белке. Расщепление высвобождает транскрипционный фактор и активирует целевой ген, оказавшись внутри ядра.

Работает ли адаптированный SynNotch?

Функцию рецептора SynNotch тестировали с четырьмя различными типами адаптеров, каждый из которых состоит из отдельного и клинически значимого антитела (см. Таблицу 1). Клетки synNotch инкубировали совместно с соответствующими опухолевыми клетками и подвергали воздействию различных концентраций адаптера. Через 48 часов клетки анализировали с помощью проточной цитометрии для измерения экспрессии генов. Экспрессия целевого гена должна увеличиться, если молекулы-адаптеры успешно связываются с опухолевой клеткой с одной стороны и рецептором synNotch с другой.

ТАБЛИЦА 1: Список антител, использованных для тестирования универсального адаптера. Каждое антитело нацелено на определенный ... [+] антиген, обнаруженный в опухолевых клетках.